蛋白提取是許多實(shí)驗(yàn)室都會(huì)涉及到的實(shí)驗(yàn)，操作起來(lái)也是非常的簡(jiǎn)單。

對(duì)細(xì)胞內(nèi)及組織中蛋白質(zhì)的分離提取均須先將細(xì)胞破碎，使其充分釋放到溶液中。不同生物體或同***生物體不同的組織，其細(xì)胞破壞難易不***，使用方法也不完全相同。主要的方法有：

（***）機(jī)械勻漿

（二）反復(fù)凍融

（三）超聲波

（四）表面活性劑處理

（五）低滲或高滲溶液

通常是將組織或細(xì)胞按照1：10（重量與體積比，w/v）的比例放入冰冷的蛋白提取液，破碎細(xì)胞后，將蛋白釋放入溶液，通過(guò)離心與其他雜質(zhì)成分分離。

常用的蛋白質(zhì)提取液包含以下成分：

（***）緩沖體系

緩沖體系主要用于穩(wěn)定溶液的pH值，阻止少量酸堿對(duì)溶液pH值的影響，保持其與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生理狀態(tài)的pH值（7.0-7.5）基本***致，對(duì)維持溶液中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定十分必要。常用的生物緩沖體系有Tris-base，Hepes和MOPS等等。  

（二）鹽金屬離子和金屬螯合劑

許多蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中才能溶解，因此提取液中需要包含***定的鹽離子。***般采用0.15mol/L左右的NaCl或KCl來(lái)模擬生理狀態(tài)下的離子強(qiáng)度。但是二價(jià)金屬離子如Ca2+、Mg2+多是金屬酶的組成部分，參與其活性調(diào)節(jié)，去除二價(jià)金屬離子能抑制這些酶的活性，對(duì)提取的蛋白質(zhì)起保護(hù)作用。通常在蛋白質(zhì)提取液中加入金屬離子螯合劑，例如乙二胺四乙酸(EDTA)，可以去除這些金屬離子。  

（三）還原劑

細(xì)胞***旦破碎，由于和氧接觸以及生物抗氧化劑被稀釋?zhuān)瑢?dǎo)致很多蛋白質(zhì)尤其是含巰基蛋白被氧化而失活。加入還原劑，如二硫蘇糖醇（DTT）、巰基乙醇（ME）、抗壞血酸（Vitamin C）等可以有效阻止巰基蛋白的氧化，保持其活性。  

（四）表面活性劑

表面活性劑，又稱(chēng)去垢劑，為雙極性分子，同時(shí)具有疏水性與親水性基團(tuán)。通過(guò)與“膜結(jié)合蛋白”疏水區(qū)的結(jié)合，增強(qiáng)其水溶性，使其能在水溶性提取液中穩(wěn)定存在。常用的表面活性劑有陰離子型（如脂肪酸鹽、SDS及脫氧膽酸鈉等），陽(yáng)離子型（如氧化芐烷基二甲基銨等）及非離子型（Triton X-100 、Tirton X-114、NP-40和Tween-20）等。非離子型表面活性劑比離子型溫和，不易引起酶失活，應(yīng)用較多。對(duì)于膜結(jié)構(gòu)上的蛋白，常采用膽酸鹽處理，兩者形成復(fù)合物，并帶上凈電荷，由于電荷的排斥作用能使膜破裂，起到破膜作用。此外，還有兩性表面活性劑，如CHAPS，加入后可避免蛋白質(zhì)凍存導(dǎo)致的沉淀變性，多用于等點(diǎn)聚焦電泳。  

（五）酶抑制劑

細(xì)胞中普遍存在蛋白水解酶和磷酸酶，細(xì)胞破碎后能從膜性結(jié)構(gòu)（溶酶體）中釋放出來(lái)。因而，蛋白提取時(shí)要注意防止蛋白酶引起的水解和磷酸酶（去磷酸化）等對(duì)蛋白質(zhì)樣品的化學(xué)修飾。低溫是抑制酶活性、防止蛋白水解和修飾有效方式之***。加酶抑制劑也同樣起到保護(hù)作用。